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差示文库构建方法 天天亮点

时间:2023-04-03 12:29:23 来源:互联网 分享至:


(资料图片仅供参考)

1、 差示文库(ifferential library) 构建方法,将A 细胞的mRNA 反转录生成CDNA 第一链,将该CDNA 与B 细胞过量的mRNA (10~ 20倍) 进行杂交,A 细胞如果有不同于B 细胞的特殊基因表达,则会产生该基因的mRNA 和反转录后形成的cDNA,该CDNA 就不能与B 种细胞的mRNA 形成杂交体。该杂交体反应产物再经羟基磷灰石柱层析,便可分离纯化出未形成杂交体的cDNA,它是A 细胞中的特殊表达的基因。以该CDNA 为模板合成互补的CDNA第二链,再以该双链CDNA 构建CDNA 文库,即差示文库,可从中筛选获得目的基因。

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